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1、前言

咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，因此，咖啡因也是普遍被使用的精神药品。适度地使用咖啡因具有舒张血管、促进血液循环、预防高血压、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、减肥等药理和生理作用，但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，能够导致“咖啡因中毒”，如神经过敏，易怒，焦虑，震颤，肌肉抽搐（反射亢进），失眠和心悸。中国把咖啡因列为“精神药品”管制，属于一种毒品。目前有关咖啡因检测分析的研究报道不多，为此本文通过使用SPE 1000全自动固相萃取系统对人体血液中咖啡因进行回收率测定分析，探索血液咖啡因样本检测的方法。

2、实验过程2.1仪器与试剂

SPE 1000全自动固相萃取系统，永利3044浏览器

MV5多通道平行浓缩系统，永利3044浏览器

LC600 二元高压梯度高效液相色谱，永利3044浏览器

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：PZ12602）

血液替代品：牛血清，市售

2.2工作液配制

咖啡因标准储备液：100μg/mL

咖啡因标准工作液：取1mL标准储备液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL标准工作液

2.3实验部分

2.3.1样品制备

取血液样本1mL加入磷酸盐缓冲液1mL平衡，加入50μL标准工作液，混合均匀，加标浓度为500ng/mL，待固相萃取。

2.3.2净化与浓缩

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：PZ12702）用5mL甲醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸盐缓冲液进行活化，取全部样液上样，上样结束后用2mL磷酸盐缓冲液和2mL水淋洗萃取柱，在真空状态下干燥0.5min，最后用5mL 磷酸盐缓冲液近干后，用流动相定容至1mL 。涡旋混匀，0.22μm滤膜过滤，待检测。

2.3.3 高效液相色谱检测条件

色谱柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm

波长：272nm

流速：1mL/min

柱温：40℃

进样量：20μL

流动相：甲醇-水= 24：76

3、实验结果

图1标准样品色谱图

图2加标样品色谱图

图3空白样品色谱图表1 加标回收率结果

4、结论

本次实验展示了一种使用EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：PZ12702）对血液中咖啡因进行萃取净化，其加标回收率95.8%~99.2%，重复性RSD为1.6%。说明EZsep^TMHLB固相萃取柱适用于血液中咖啡因的检测，并且在回收率和平行性上表现优异。

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耗材专区血液中咖啡因的测定

2.2工作液配制

2.3.1样品制备

2.3.2净化与浓缩

2.3.3 高效液相色谱检测条件